- 刘娜;聂璐薇;姚达宝;陈施玲;潘超;徐莉;
目的：构建携带人GFAP启动子和p27基因的重组腺病毒载体并进行鉴定，研究其转染星形胶质细胞后对细胞生长增殖的影响。方法：对实验室原有的pGFAP-IRES2-EGFP-p27质粒进行转化、扩增、抽提、酶切后进行琼脂糖凝胶电泳鉴定和测序；通过设计引物，进行PCR扩增后分别获取GFAP启动子和p27基因片段，依次交换入线性化表达载体GV269和p DC315-GFAP-EGFP载体，最终构建pDC315-GFAP-p27-EGFP；将其转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒，经在HEK293细胞反复扩增数代后，进行纯化及滴度检测；转染星形胶质细胞后观察细胞生长和荧光表达情况；检测转染后星形胶质细胞细胞周期和凋亡比例、p27的表达情况。结果：经酶切鉴定和测序，成功鉴定真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27；经PCR鉴定和测序，成功构建重组腺病毒过表达载体pDC315-GFAP-p27-EGFP；经包装后，Ad-GFAP-p27-EGFP可见EGFP表达和细胞致病效应，而且能够特异性地在星形胶质细胞中表达绿色荧光蛋白；经流式细胞仪分析，转染星形胶质细胞72 h后，与对照组相比，转染组处于S期的细胞比例下降，G1和G2期的细胞比例增高，凋亡比例增高（P<0.05）；转染后第5天，星形胶质细胞中p27蛋白表达水平较对照组有明显升高（P<0.05）。结论：利用腺病毒包装系统AdMax成功构建了携带人GFAP启动子和p27基因的重组腺病毒过表达载体，其可以特异性转染星形胶质细胞过表达p27，对星形胶质细胞的生长增殖有明显抑制作用。
2023年10期 v.18 564-568+573页 [查看摘要][在线阅读][下载 1342K] [下载次数：185 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 陈超;聂郁林;陆心恬;林玥伶;龙颖;李金声;
目的：建立一种SD大鼠局灶性脑缺血再灌注改良模型，以降低模型制备难度，提高模型的稳定性。方法：SD雄性大鼠30只，随机分为模型组24只和假手术组6只。采用经改良的颈外动脉进线栓法建立模型，并通过神经功能缺损评分、伊文思蓝（EB）染色及TTC染色进行综合评价。结果：该改良方法建模成功率为87.5%，梗死区可明显看到EB渗出，TTC染色显示梗死体积占大脑总体积的（10.65±4.41）%。结论：经改良后，明确了颈总动脉结扎位置，以及颈外动脉结扎、剪断位置，采用颈外动脉残端直接进线栓建立模型，降低了模型制备难度，提高了模型的稳定性和成功率。
2023年10期 v.18 569-573页 [查看摘要][在线阅读][下载 1287K] [下载次数：527 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 孟宪宇;李秋红;刘岩;张旭;王磊;姜巍;李凤久;路来金;陈焕新;
目的：探寻周围神经感觉和运动束损伤后不同时间点的蛋白变化，为周围神经再生研究提供标志蛋白。方法：制备SD大鼠股神经运动束和隐神经（感觉束）在正常状态、Sunderland V损伤8 h和8 d时间点模型；神经断端远侧5 mm样本取材，6种样本共18组；分离、提取、纯化及定量蛋白后，应用差异凝胶电泳技术荧光标记蛋白质，凝胶图像扫描，选择差异表达>1.5倍的蛋白点定义为高差异表达蛋白；用图像分析软件BVA分析显示9块凝胶平均分离1586个蛋白点，胶上切割、酶切、点靶，质谱仪进行肽质量指纹谱（PMF）分析鉴定，识别各组间的高差异表达蛋白质图谱。应用逆转录PCR(RT-PCR)技术分析验证蛋白质组学研究的结果。结果：共有12个高差异表达蛋白点被确切鉴定：TPM1、Serpina10、NF-L、DRP-2、CaBP1、Serpina3n、Peroxiredoxin-2、Gng7、HSP70、LDHB、Enolase2、PDIA3。其中，Serpina10、TPM1、NF-L、DRP-2、CaBP1是隐神经正常状态、损伤8 h和8 d时间点时比较蛋白质组学高差异蛋白；Serpina10、Serpina3n、Peroxiredoxin-2、Gng7、HSP70、LDHB、Enolase2、CaBP1、PDIA3是股神经运动束正常状态、损伤8 h和8 d时间点时比较蛋白质组学的高差异蛋白。Serpina10和CaBP1是隐神经和股神经运动束损伤后多时间点比较蛋白质组学均出现的高差异表达的蛋白。蛋白质组学的结果与RT-PCR检测的mRNA转录水平相一致。结论：周围神经感觉束、运动束损伤后不同时间的比较蛋白质组学表达存在明显差异，Serpina10和CaBP1作为高差异表达蛋白，可能为周围神经再生研究提供新的方法。
2023年10期 v.18 574-578页 [查看摘要][在线阅读][下载 1298K] [下载次数：197 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 邓刚;肖君;尚珂;周罗绮;秦川;田代实;
目的：探讨吸烟对急性缺血性脑卒中患者外周免疫细胞的影响。方法：纳入165例发病在72 h内的急性缺血性脑卒中患者，收集基线临床和实验室数据。采集外周血标本，采用流式细胞术分析淋巴细胞亚群的数量和百分比，并将吸烟者与非吸烟者进行比较。对不同参数进行单因素和多因素Logistic回归分析。采用Spearman分析来评估吸烟强度与淋巴细胞亚群之间的相关性。结果：在急性缺血性卒中患者中，与非吸烟者相比，吸烟者的B细胞数量（P<0.001）和百分比更高（P=0.009），总T细胞（P=0.013）和抑制性T细胞数量更高（P=0.032）。单因素Logistic回归分析显示，吸烟与B细胞数量（OR=3.384,95%CI 1.621～7.067,P=0.001)和百分比（OR=2.243,95%CI 1.095～4.596,P=0.027）、T细胞数量（OR=2.104,95%CI1.055～4.196,P=0.035)显著相关。相关性分析显示，吸烟强度与B细胞数量、B细胞百分比、T细胞数量呈正相关（P值分别为0.002、0.009、0.012）。结论：吸烟是导致急性缺血性脑卒中患者外周血B细胞数量和百分比增加、T细胞数量增加的独立危险因素。
2023年10期 v.18 579-583页 [查看摘要][在线阅读][下载 1078K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 胡春雷;廖博;王琪;赵海恩;乔欢;李小军;
目的：研究并验证槲皮素治疗脊髓损伤（SCI）的疗效及可能的作用机制。方法：通过网络药理学方法，检索中药系统药理数据库和分析平台（TCMSP）数据库、GeneCards、DisGeNET数据库及OMIM数据库，筛选槲皮素治疗SCI的相关靶点，构建Venn图，得到槲皮素-SCI关键靶点，进一步将关键靶点基因输入STRING数据库，构建蛋白质-蛋白质相互作用网络（PPI）。将关键靶基因输入Metascape数据库进行GO及KEGG富集分析。使用AutodockTools软件进行分子对接。最后通过体外细胞试验进行验证。结果：通过筛选，共得到259个槲皮素-SCI关键靶点；通过度值、中介中心度及接近中心度值筛选，最终纳入了槲皮素作用于SCI的关键靶基因10个，分别为AKT1、VEGFA及TP53等基因。槲皮素可以与靶点蛋白AKT1、VEGFA和TP53自发结合。GO生物学过程分析结果表明，槲皮素可能通过凋亡信号通路参与治疗SCI。体外细胞试验结果表明，槲皮素通过抑制细胞凋亡增加双氧水（H2O2）处理的PCP12细胞的细胞活力。结论：槲皮素可能通过抑制细胞凋亡治疗SCI，提示槲皮素对治疗SCI可能有一定的应用前景。
2023年10期 v.18 584-588页 [查看摘要][在线阅读][下载 1491K] [下载次数：255 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]